|
насыщения.
Подученный препарат подвергали стерилизующей фильтрации через фильтр
Зейтца с пластинкой СФ и расфасовывали по ампулам и флаконам.
Стерильность полученного препарата подтверждали высевом на МПБ, МПА и
среду Китт-Тарроци, а безвредность на белых мышах и морских свинках. Посевы
выдерживали в термостате при 37° С восемь суток. Лактоглобулин вводили
подкожно двум морским свинкам массой 230-240 г в дозе по 3 мл и четырем
белым мышам массой 16-18 г по 0,5 мл с последующим наблюдением за животными
в течение 5 дней.
Исключение примесей балластных белков в препарате производили
электрофоретически. Препарат хранили в холодильнике при температуре +3 +5°
С.
2.2. Изучение специфической иммунологической реактивности телят в
постнатальный период.
Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови телят до приема молозива и
через 24 ч после рождения определяли цинк-сульфатным методом [A. D. MсEwan,
E. W. Fisher, I. E. Selman and W. J. Penhale, 1970].
Концентрацию иммуноглобулинов молозива коров с учетом их возраста
вычисляли по уровням линейной регрессии [H. Balbierz, M. Nicolaijczuk, J.
Zeilinski, 1983].
Эффективность колостральных иммуноглобулинов изучали по отношению
содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови неонатальных телят к
количеству поступивших с молозивом.
Количественную характеристику абсорбции колостральных иммуноглобулинов
классов G, М и А устанавливали методом радиальной иммунодиффузии [G.
Mancini, A. O. Carbonara and J.F. Heremans, 1965; В. М. Чекишев, 1977].
Выделенные иммуноглобулины классов G, М и А служили антигенами для
иммунизации кроликов [R. A. Wilson and I. W. Jutila, 1976] с целью
получения соответствующих моноспецифических антисывороток.
Степень катаболизма иммуноглобулинов изучали определением их классов в
сыворотке крови методом радиальной диффузии. Иммуноглобулины в фекалиях
определяли по E. F. Logan, W. J. Penhale, 1972; Р. П. Маслянко, 1982.
После измерения диаметров зон преципитации концентрацию иммуноглобулинов
рассчитывали математическим способом, исходя из прямо пропорциональной
зависимости между ней и квадратом диаметра кольца [Э. Бем, 1979].
Колостральную сыворотку отделяли после добавления сычужного фермента.
Лактоглобулин получали добавлением к сыворотке молозива насыщенного
раствора сульфата аммония с последующим диализом против 0,01М рН 7,6
Na2HPO4; KН2PO4.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с
использованием критерия достоверности Стьюдента.
2.2.1. Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови телят до приема
молозива и через 24ч после рождения и взаимосвязь между концентрацией
иммуноглобулинов и проявлением синдрома нарушения пищеварения. Проведенные
исследования показали, что концентрация колостральных иммунных глобулинов в
крови телят до приема молозива составила 0,18±0,08 мг/мл, этот уровень
главным образом связан с IgМ. Через 24 часа после приема молозива
содержание иммуноглобулинов достигло 23,94±1,71 мг/мл или увеличилось в 133
раза (табл. 2.1).
Таблица 2.1
Содержание иммунных глобулинов в сыворотке крови новорожденных телят
(n=20).
|Группы телят |Средн|Диспер|Средне|Средняя |Точност|Доверительн|Относит|
| |яя |сия |е |арифмети|ь |ый |ельная |
| |арифм| |квадра|ческая |прямых |интервал, |ошибка |
| |етиче| |тическ|ошибка |измерен|мг/мл |(погреш|
| |ская,| |ое | |ий | |ность),|
| |мг/мл| |отклон| | | |% |
| | | |ение | | | | |
|До приема |0,18 |0,0035|0,019 |0,008 |0,02 |0,16-0,20 |11,1 |
|молозива | | | | | | | |
|Через 24 ч |23,94|14,69 |3,83 |1,71 |4,75 |18,19-28,69|19,8 |
|после рождения:| | | | | | | |
| | | | | | | | |
|I группа — | | | | | | | |
|контроль | | | | | | | |
|II группа — |18,26|0,16 |0,4 |0,18 |0,49 |17,77-18,75|2,68 |
|энтеритная | | | | | | | |
|форма | | | | | | | |
|колибактериоза | | | | | | | |
|III группа — |15,37|0,66 |0,43 |0,19 |0,53 |14,84-15,90|1,24 |
|септическая | | | | | | | |
|форма | | | | | | | |
|колибактериоза | | | | | | | |
Новорожденные телята с содержанием иммуноглобулинов 23,94± 1,71 мг/мл
(доверительный интервал 19,19-28,69 мг/мл) переболели легкой формой
колибактериоза на третьи сутки. Даже такая высокая концентрация
иммуноглобулинов не обеспечивала иммунологический статус новорожденных
телят, что связано со значительной инфицированностью внешней среды и
снижением вследствие этого защитного уровня молозива.
Содержание иммуноглобулинов через 24 часа в сыворотке крови телят сильно
варьирует и составляет от 19,85 мг/мл до 29,11 мг/мл. Такая разница
объясняется количеством проглоченного теленком молозива.
Способность новорожденных животных адаптироваться к изменениям внешней
среды лимитировано и изменение условий, не влияющих на взрослых животных,
может плохо отразиться на состояние здоровья телят. Известно, что стресс
является способствующим фактором возникновения колибактериоза у телят.
Причиной стресса могут быть различные нарушения условий содержания, порой
самые безобидные, поэтому предотвратить стресс весьма трудно. Даже
перемещение является причиной стресса, который приводит к увеличению уровня
заражения инфекционными агентами. Низкая температура, сквозняки, влажная
подстилка способствуют возникновению и распространению инфекции.
Следовательно, иммунологический статус, необходимый для защиты организма,
зависит от количества молозива, проглоченного теленком в первые минуты
жизни и условий внешней среды.
Исходя из этого, невозможно точно указать количество колостральных
иммуноглобулинов, обеспечивающих иммунологическую защиту животных.
При концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови телят 18,26±0,18
мг/мл (доверительный интервал 17,77-18,75 мг/мл) заболевание протекает с
расстройством пищеварения,и сопровождается средней тяжестью дегидратации а
также диареей. Такие телята отказываются от молозива, с трудом поднимаются,
задняя часть туловища испачкана фекалиями, влажная.
Длительность течения болезни при такой концентрации иммуноглобулинов
обычно составляет 4-6 дней. Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови
телят с энтеритной формой колибактериоза ниже, чем в контрольной группе
(Р0,05).
. Пропердиновая активность в сыворотке крови достоверно повышалась
(Р>0,05) в контрольной группе животных в 2-5 и 10-дневном возрасте, в то
время как в группе больные-павшие, содержание пропердина в сыворотке
крови в аналогичный период существенно не изменялось (Р>0,05).
РАЗДЕЛ 4
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ НОВОРОЖДЕННЫХ
ТЕЛЯТ
4.1. Эффективность применения колостральной сыворотки и лактоглобулина для
коррекции иммунодефицита неонатальных телят
Сыворотка молозива коров обладает высокой антибактериальной
активностью и защищает организм новорожденного от внедрения бактерий,
других чужеродных клеток и токсинов. К антибактериальным факторам
сыворотки молозива относятся иммуноглобулины (антитела), которые имеют
большое значение для невосприимчивости новорожденных телят к инфекционным
болезням. Поскольку плацента коров непроницаема для антител
крови,·новорожденные фактически лишены защиты от микроорганизмов. В
постнатальный период они получают антитела в виде иммуноглобулинов
молозива, которые в первые часы жизни в неселективном виде проходят через
стенки их кишечника в кровь.
Колостральную сыворотку получали путем добавления 10 мл 1 %-ного
раствора пепсина на 100 мл молозива с последующим выдерживанием смеси в
термостате при 38° С в течение 4-6 ч. Сыворотку отделяли фильтрацией через
(бумажный фильтр от взвешенных частиц, затем проводили фильтрацию через
бактериальный фильтр Зейтца.
Для выделения лактоглобулинов к сыворотке молозива добавляли два или
три объема дистиллированной воды в зависимости от содержания белка, затем в
смесь при постоянном помешивании добавили тонкой струей насыщенный раствор
сернокислого аммония до 38 %-ного насыщения. Выпавший осадок
лактоглобулинов отделяли фильтрацией. Лактоглобулины освобождали от
сернокислого аммония путем диализа. Впоследствии лактоглобулины разбавляли
дистиллированной водой до получения 10 %-ного раствора белка, рН
полученного раствора доводили до 7,2, 3 %-ным едким натрием и добавляли в
раствор хлорид натрия до 0,85 %-ного насыщения.
После проверки на стерильность и безвредность лактоглобулин
использовали с профилактической и лечебной целью.
Работа проведена в учебном хозяйстве «Кетросу» района Анений Ной. В
данном хозяйстве анализировали условия содержания и кормления стельных
коров и новорожденных телят, наблюдая клиническую картину и течение
болезни, анализировали эффективность лечебных мероприятий, производили
патологоанатомическое вскрытие и бактериологические исследования с
последующей идентификацией выделенных культур.
Для патологоанатомических и бактериологических исследований
использовали животных не подвергшихся лечению антибиотиками и
химиотерапевтическими препаратам, через 1-4 ч после гибели, а также убитых
с диагностической целью.
Высевы производили на МПА, МПБ и агар Эндо в чашках Петри из
содержимого крови, сердца, селезенки, почек, печени, желчного пузыря,
костного мозга, мезентеральных лимфатических узлов пораженных участков
тонкого отдела кишечника.
Для идентификации снимали с агара Эндо по 3 одинаковые, не
отличающиеся по цвету и морфологии, колонии.
Видовую принадлежность выделенных культур устанавливали путем изучения
культурально-морфологических и тинкториальных свойств, ферментативной
активности, а также по патогенности для белых мышей и серологической
типизации.
Анализ показал, что в обследованном хозяйстве имеет место нарушения
санитарно-гигиенических и ветеринарных правил содержания и кормления коров
и новорожденных телят. В хозяйстве в первые 2-3 дня жизни заболевали почти
все новорожденные животные с признаками диареи. Летальность варьировала до
50 % и более. Гибель новорожденных наступала в отдельных случаях в первые
сутки жизни, но в большинстве случаев в течении первых десяти суток.
Клиническая картина болезни проявлялась угнетением, вялостью, пониженным
аппетитом, диареей.
Патологоанатомическому и бактериологическому исследованию подвергнуто
5 трупов и фецес больного теленка, У 4 трупов картина
патологоанатомического вскрытия соответствовала специфической форме
колибактериоза, а в одном случае изменения характеризовались поражением
желудочно-кишечного тракта и мезентеральных лимфатических узлов.
Из органов 5 трупов и фецеса больного теленка выделена 21 культура.
Вирулентность выделенных культур была различной и она варьировала в
пределах одного трупа и даже одного органа.
Из большинства паренхиматозных органов, или мезентеральных
лимфатических узлов и пораженных участков тонкого участка кишечника
выделена чистая культура Е. coli энтеропатогенных серогрупп (О78:К80;
О119:К69; О137:К79). Серологическую типизацию по О-антигену проводили при
помощи О-диагностических сывороток, приготовленных Армавирской биофабрикой.
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16
|
